[ Pobierz całość w formacie PDF ]
.Ilości substancji wydalanych z organizmu (PAR-G, PAR-S, MET oraz MET-H) różnią się odwartości uzyskanych za pomocą metody opisanej w podpunkcie IV.1.Może wynikać toz faktu, iż próbki badane w niniejszej metodzie pochodziły od pacjentów z zapaleniemkłębuszków nerkowych, bądz
niewydolnością nerek.Osłabienie zdolności wydalniczych maznaczący wpływ na stężenie substancji leczniczych i ich metabolitów w moczu, powodującakumulację leków i produktów metabolizmu w organizmie.84Rysunek IV.2.4.Przykładowe chromatogramy, zarejestrowane techniką UHPLC, ekstraktów moczu pacjentówzażywających leki: (a) propranolol (40 mg) oraz paracetamol (500 mg)  ekstrakcja na kolumience C18Bakerbond , (b) propranolol (40 mg) oraz paracetamol (500 mg)  wyekstrahowane na kolumience Oasis HLB ,(c) metoprolol (50 mg)  ekstrakcja na kolumience Oasis HLB.Detekcję prowadzono za pomocą detektoraUV/VIS.W celu potwierdzenia poprawności proponowanej metody, próbki zawierająceparacetamol i metoprolol przebadano również za pomocą metody przedstawionej w punkcieIV.1.Uzyskane wartości były zbliżone, a różnice pomiędzy wynikami dla poszczególnychanalitów nie przekraczały 4%.Opracowana metoda analityczna umożliwia oznaczenie 6 substancji farmaceutycznychoraz 6 metabolitów w moczu ludzkim w czasie 7,5 minut.Dzięki zastosowaniu technikiUHPLC oraz opracowaniu odpowiedniej procedury ekstrakcyjnej, było możliwe obniżeniewartości granic oznaczalności i wykrywalności, w porównaniu do metody przedstawionej wpodrozdziale IV.1.Dłuższy czas konieczny do przygotowania próbki kompensowany jestkrótszym czasem analizy chromatograficznej oraz niższymi wartościami LOD.85IV.3.Badania wpływu oddziaływań analitów z fazą stacjonarną na procesrozdzielenia badanych leków oraz ich metabolitów.Na rynku dostępne są różne kolumny chromatograficzne różniące się rodzajem złożaoraz sposobem przyłączenia podstawników organicznych do żelu krzemionkowego.Ponadto,polarne i jonowe właściwości wypełnień kolumn chromatograficznych, odpowiedzialne zawystąpienie oddziaływań drugiego rodzaju, mogą prowadzić do sytuacji, kiedy kolumnychromatograficzne o zbliżonych parametrach złoża różnią się od siebie w znaczący sposób.Wpraktyce nie jest możliwe dokonanie wyboru kolumny chromatograficznej bez przebadania jejprzydatności do rozdzielania określonych analitów.Mechanizm rozdzielenia w RP-HPLC różni się od rozdzielania zachodzącego między dwomanie mieszającymi się rozpuszczalnikami.W przypadku analiz za pomocą RP-HPLC mamy doczynienia z trzema podstawowymi zjawiskami.Pierwszym zjawiskiem wpływającym narozdzielanie substancji jest ich podział pomiędzy ciekłą fazę stacjonarną i fazą ruchomą[132].Zgodnie z prawem podziału Nernsta, stosunek stężeń substancji chromatografowanych,w obu fazach w stanie równowagi jest wielkością stałą i charakterystyczną w danychwarunkach dla danej substancji.Gdy stężenie składnika w fazie ruchomej jest większe, niż towynika z prawa podziału, substancja przechodzi do fazy stacjonarnej.Jeśli po chwili napłyniefaza ruchoma o mniejszym stężeniu tej substancji, nastąpi częściowe przejście z fazystacjonarnej do fazy ruchomej.Kolejnym zjawiskiem jest adsorpcja analitów na powierzchnizwiązanej fazy stacjonarnej [133].Substancje chromatografowane mogą migrować międzyłańcuchami alkilowymi i adsorbować się na powierzchni nośnika, którym zwykle jest żelkrzemionkowy.Może to powodować zwiększenie czasu retencji analitów zawierającychpolarne grupy funkcyjne.Trzecim spotykanym zjawiskiem jest adsorpcja organicznegoskładnika fazy ruchomej na powierzchni adsorbentu i następujący kolejno podział analitówmiędzy fazą ruchomą a zaadsorbowaną warstwą rozpuszczalnika [134-137].Dlatego teżoddziaływanie fazy stacjonarnej z chromatografowanymi substancjami jest wypadkowądziałania następujących czynników: związanych podstawników organicznych,zaadsorbowanych cząsteczek rozpuszczalników oraz wolnych grup silanolowych [132-136].86Kontynuując badania nad rozdzielaniem chromatograficznym leków oraz ichmetabolitów przebadano 5 różnych kolumn chromatograficznych, w celu wyboru optymalnejkolumny chromatograficznej do oznaczeń badanej mieszaniny związków.Badaniaprowadzono w układzie chromatograficznym opartym o fazę ruchomą zawierającą MeOH,0,05% TFA oraz ACN.Parametry stosowanych kolumn chromatograficznych przedstawionow tabeli IV.3.1.Tabela IV.3.1.Charakterystyka stosowanych w badaniach kolumn chromatograficznych [ Pobierz całość w formacie PDF ]